Здравствуйте! Давно наслышан высоком уровне микробиологии и цитологии в Удомле, в связи с чем собственно и хочу посоветоваться. Пишу в общий раздел, т.к не нашел раздела микробиологии на этом форуме, что неудивительно.
Кто сталкивался с наладкой трансфекции эукариотических клеток плазмидами, расскажите, как лучше и легче это делать?
Я пока пользуюсь Fugene от Roche, методика у него длинная и странная. Уверен, что она не оптимизирована по трудоёмкости. А скорее наоборот - трудоёмкость во внимание не принималась.
На днях заказал трансфекционный реагент от Сигмы ESCORT IV
, ещё не пробовал.
Поскольку всё равно буду менять методику, так лучше сразу попрововать оптимизированный вариант, чтобы полегче и побыстрее...
Клетки у меня сейчас 293 и C3H.
Плазмиды много, эффективность меня беспокоит не очень, в смысле, что стабильные 30% меня устроят, главное чтобы нетрудоёмко и воспроизводимо.
Ещё деталь: как быстро клетки набирают плазмиду? Пишут, что 24-72 часа с липофектамином - это правда?
Можно ли, скажем, трансфицировать сразу при посеве?
Говорят, что липосомный реагент лучше замешивать в стеклянной пробирке а не в эппендорфе, это правда? или теоретические домыслы?
А насколько важно чтобы 293 клетки не достигали насыщения? Опять же мне достаточно 30% эффективности, если можно использовать уже достигшие насыщения клетки, то насколько бы это было меньше мороки...